在細胞培養、生物制藥、科研實驗等領域，支原體污染是貫穿全流程的隱形隱患，不僅會干擾細胞生長狀態、篡改實驗數據，還會影響生物制品質量與實驗結果可靠性。傳統支原體檢測方法多依賴PCR儀、電泳儀、熒光顯微鏡等精密設備，操作繁瑣、耗時長、易出現假陽性，且需專業人員操作，難以滿足快速篩查、日常質控的需求。針對行業痛點，這款支原體檢測試劑盒依托創新顯色檢測技術，實現了極簡操作、極速出結果、超高靈敏度的檢測突破，成為細胞培養支原體篩查的高效解決方案。

　　一、生物試劑特色：兼顧便捷性與精準性

　　本試劑盒摒棄傳統檢測的復雜流程與設備依賴，以四大核心優勢，打造適配基層實驗室、常規質控的高效檢測工具，全面解決傳統方法的操作壁壘與結果誤差問題。

　　-設備零門檻，無需核酸提取：檢測全程僅需1μl培養細胞上清液和1臺常規水浴鍋，告別基因組DNA提取步驟，無需熒光顯微鏡、PCR儀、電泳儀、凝膠成像儀、生物發光檢測儀等復雜實驗設備，普通實驗室均可開展檢測，大幅降低實驗成本與場地要求。

　　-極速檢測，1小時出結果：突破傳統檢測數小時甚至數天的時長瓶頸，全程孵育僅需60分鐘即可完成檢測，實現樣本快速篩查，尤其適合細胞傳代前、樣本入庫前的緊急質控，不耽誤實驗進度，提升科研與生產效率。

　　-一步操作，肉眼直觀判讀：全程僅需單步加樣與孵育操作，無需多步開蓋、電泳分離等環節，實驗結果通過反應液顏色變化直接肉眼辨別，操作極簡且大幅降低多步操作開蓋帶來的氣溶膠污染、假陽性風險。檢測時以白紙為背景，光線充足環境下即可清晰區分陰陽性，無需專業判讀經驗。

　　-超高靈敏度，覆蓋主流污染株：檢測靈敏度遠超常規PCR法，可精準識別微量支原體污染，針對性覆蓋細胞培養中98%的常見污染支原體，包括豬鼻支原體、精氨酸支原體、口腔支原體、萊氏無膽甾原體、發酵支原體、唾液支原體、人型支原體、梨支原體等，檢測譜廣、特異性強，杜絕漏檢風險。

　　二、試劑盒規格與組分（25T）

　　本試劑盒為25次檢測規格（25T），組分配比精準、配套齊全，開箱即可開展實驗，無需額外配制試劑，保障實驗穩定性與重復性，各組分規格如下：

　　所有組分均經過嚴格質控，低溫保存穩定性強，按規范儲存可保障檢測效果，其中溶液A、陽性對照需-20℃避光儲存，使用前按需解凍。
 

　　三、標準化實驗操作流程

　　為保障檢測結果精準可靠，需嚴格遵循以下操作步驟，全程把控冰上操作、溫度控制等核心細節，避免污染與誤差。

　?。?）待測細胞培養液上清制備

　　選取培養2-3天、融合度≥80%的待測細胞，收集至少200μl細胞培養液；將培養液以200g離心5分鐘，離心后吸取上清液用于檢測，注意避開管底部50μl培養液及細胞沉淀，防止細胞碎片干擾檢測結果。
 

　　（2）反應體系配制（冰上操作）

　　實驗前將溶液A、溶液B、陽性對照、石蠟油解凍，解凍后立即置于冰上備用；取出-20℃儲存的溶液A，輕輕顛倒混勻，切勿劇烈震蕩。

　　按待測樣本數量（N），在冰上配制反應體系，考慮陰性對照、陽性對照及移液器誤差，推薦配制N+3個反應體系，單個體系與總體積配比如下：

　　

　　體系配制完成后，用振蕩器輕輕混勻，分裝至200μlPCR管中，每管精準分裝24μl混勻反應液，全程保持冰上操作。

　?。?）樣本上樣（冰上操作）

　　上樣全程保持冰上操作，石蠟油需提前冰上預冷，嚴格更換槍頭避免交叉污染：

　　-待測樣品：向反應管中加入1μl離心后的細胞上清液，用加樣槍輕輕吹打5次混勻；

　　-陰性對照：不添加樣品，或加入1μl無菌水；

　　-陽性對照：加入1μl陽性對照品，輕輕吹打5次混勻。

　　上樣完成后，每管反應液上方輕輕加入25μl石蠟油（水浴加熱模式），防止孵育過程中液體蒸發影響結果；若采用PCR儀孵育，無需添加石蠟油。
 

　?。?）恒溫孵育反應

　　將水浴鍋（或PCR儀）溫度校準至61℃，放入反應管恒溫孵育60分鐘；建議提前用溫度計校準水浴鍋實際溫度，59-63℃范圍內可正常反應，但溫度偏差會影響檢測靈敏度，嚴禁使用烘箱、金屬浴替代加熱設備。反應全程嚴禁開蓋，避免氣溶膠擴散導致后續實驗假陽性；反應結束后，將反應管密封包扎，丟棄至專用生物垃圾桶并及時清理。

　?。?）結果判斷標準

　　孵育結束后立即取出反應管，置于室溫平衡，在光線良好環境下（以白紙為背景）觀察反應液顏色：

　　-陰性結果：反應液保持藍紫色，提示細胞培養物無支原體污染；

　　-陽性結果：反應液變為天藍色，提示細胞培養物存在支原體污染。
 

　　四、試劑應用價值與注意事項

　　本支原體檢測試劑盒適配細胞培養日常質控、科研實驗樣本篩查、生物制品放行檢測等場景，憑借無設備門檻、快速靈敏、操作極簡的優勢，有效彌補傳統檢測方法的短板，助力科研人員與生產企業筑牢支原體污染防控防線。

　　使用時需嚴格遵循低溫操作、溫度校準、無菌操作等規范，避免樣本交叉污染與溫度偏差影響結果；試劑盒組分需按要求低溫儲存，避免反復凍融，保障檢測穩定性與準確性。